DNA，生命的基本组成部分，是一分子带有遗传信息的脱氧核糖核酸。它的稳定性对于维持细胞的功能和维持遗传信息的完整性至关重要。DNA 的熔解温度（Tm）是衡量其热稳定性的关键指标，揭示了分子在一定条件下发生变性的温度。

影响 DNA 熔解温度的因素

DNA 的 Tm 受多种因素影响，包括：

碱基组成

Tm 与 DNA 序列中的碱基组成正相关。富含 GC 碱基对的 DNA 比富含 AT 碱基对的 DNA 更稳定，因为三个氢键形成的 GC 碱基对比两个氢键形成的 AT 碱基对更稳定。

离子浓度

离子浓度影响 DNA 的电荷屏蔽。高离子浓度会屏蔽 DNA 骨架上的负电荷，导致 DNA 链之间的排斥力减小，从而导致 Tm 降低。

pH 值

pH 值影响 DNA 质子的电离。低 pH 值会质子化碱基，导致 DNA 链之间的排斥力增加，从而导致 Tm 升高。高 pH 值会去质子化碱基，产生相反的效果。

DNA 长度

Tm 与 DNA 长度正相关。较长的 DNA 分子具有更多的碱基对，需要更高的温度才能打破所有氢键并使 DNA 变性。

Tm 的测量

Tm 可通过多种技术测量，包括：

紫外分光光度法

该方法测量 DNA 溶液在 260 nm 处的吸光度。随着温度升高，DNA 变性，其吸光度会增加。Tm 可通过在吸光度与温度呈线性关系的阶段确定转变的中点。

荧光法

该方法使用荧光染料与 DNA 结合。变性使染料从 DNA 表面解离，从而导致荧光强度发生变化。Tm 可通过确定荧光强度变化与温度呈线性关系的阶段的中点来确定。

Tm 的应用

DNA 的 Tm 在各种领域具有广泛的应用，包括：

分子诊断

Tm 可用于诊断特定遗传疾病。通过将变异 DNA 与正常 DNA 的 Tm 进行比较，可以检测出导致疾病的突变。

核酸杂交

Tm 可用于优化核酸杂交的条件。通过选择与待测序列具有相似 Tm 的探针，可以提高杂交效率和特异性。

聚合酶链反应 (PCR)

Tm 可用于设计 PCR 引物。引物的 Tm 应稍低于 PCR 延伸温度，以确保引物与模板 DNA 有效结合。

生物技术

Tm 可用于筛选稳定的 DNA 分子用于生物技术应用。在需要承受高温条件的应用中，Tm 较高的 DNA 分子更可能保持稳定。

DNA 的熔解温度是表征分子稳定性的关键指标。它受多种因素的影响，包括碱基组成、离子浓度、pH 值和长度。Tm 的测量可用于各种应用，包括分子诊断、核酸杂交、聚合酶链反应和生物技术。通过了解影响 Tm 的因素及其应用，我们可以更好地利用 DNA 的稳定性特性。